Aplicación de PCR en VIH

 

El PCR nos ayuda a detectar la presencia del virus en etapas tempranas de la infección, puesto que es altamente sensible y específica en un 95 y 98 %. Esta técnica detecta parte del genoma viral en una muestra sanguínea, permitiéndonos de esta manera diferenciar entre las dos cepas principales del VIH, VIH-1 y VIH-2. La PCR anidada es capaz de detectar de manera eficaz y rápida los genes principales del VIH-1 en pacientes pediátricos.

Imagen obtenida de: https://www.researchgate.net/figure/RT-PCR-and-sequencing-of-the-HIV-1-protease-and-RT-regions-HIV-1-RNA-was-isolated-from_fig1_5367711

Tema: Diagnóstico molecular del Virus del Papiloma Humano (VIH)

Objetivo: Determinar los principales genes de VIH mediante la técnica de RT-PCR la cual aporta información de valor diagnóstico gracias a su gran eficacia.

Tipo de muestra biológica: Se utilizó ADNg  de sangre periférica 

Tipo de ácido nucleico a ser extraído: Se utilizó ADNg extraído de un paciente considerado positivo para VIH-1 por PCR anidada.

Gen o secuencia a amplificar: ADNg extraído de la línea celular 8E5/LAV (8E5) que posee 1 genoma proviral defectivo del VIH-1 por célula. 

Tipo de PCR: PCR anidada

Sensibilidad analítica: Detección de hasta 10 cels/mm3.

Especificad analítica: 100%

Desnaturalización: Inicial 94 °C durante 5 minutos.

Visualización: . Los productos fueron evaluados a través de electroforesis en geles de agarosa al 2,5 % teñidos con bromuro de etidio (BrEt) para posteriormente ser secuenciados con el empleo de cebadores.

Referencias bibliográficas:

1. Frango A, Ramírez A, Duarte M, Alejos M, Valladares S, Eleizalde M, et al. Validación de cebadores específicos para la detección de los genes env y gag mediante reacción en cadena de la polimerasa anidada en pacientes pediátricos con infección por Virus de Inmunodeficiencia Humana-1 y su confirmación por secuenciación. Gac Med Caracas [Internet]. 2020;128(4):525–36. Available from: http://dx.doi.org/10.47307/gmc.2020.128.4.8